目的：通过个案研究，分析职工对医院文化建设的认知度和满意度及影响因素，提出相关合理化建议以推进医院文化建设。方法：通过文献分析法、问卷调查法等方法，探讨南京某三级甲等专科医院文化建设的实质及核心要素。结果：回收有效问卷279份，调查对象中对医院文化的认知度和满意度总体得分分别为81.41±17.01和85.01±16.08分；对医院文化概念理解占比最高的是认为医院文化是物质文化和精神文化的综合；单因素分析认为影响医院职工对医院文化认知度的因素有婚姻状况、就职时间、文化程度、职业岗位和职称；影响医院职工对医院文化满意度的因素有年龄、就职时间、文化程度和职称。结论：医院职工对医院文化建设的认知度和满意度均较高，应结合影响因素结果，以职工的需求及满意度为出发点，不断提升医疗机构文化建设水平。